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細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具,依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板,形狀、規(guī)格、用途多樣,那么如何選擇適合的培養(yǎng)板?
1.細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型)
不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細(xì)胞,通常是選用平底的,這樣便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致。因此做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí),無(wú)論是貼壁和懸浮細(xì)胞,一般選用平底板。測(cè)吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要特別注意材質(zhì), 標(biāo)示“Tissue Culture (TC) Treated"是養(yǎng)細(xì)胞用的。
U型或V型板,一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面,當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí),需要二者相互接觸刺激,這時(shí)一般會(huì)選用U型板,因?yàn)榧?xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在很小的范圍內(nèi)內(nèi)。圓底培養(yǎng)板還會(huì)用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn),需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng),如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)"等。V型板常用做細(xì)胞殺傷、免疫學(xué)血凝集實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞殺傷這種實(shí)驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后,低速離心)。
2.培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536 孔等
大多數(shù)用戶在組織培養(yǎng)瓶上開(kāi)始組織培養(yǎng)。不過(guò),許多應(yīng)用也需要多孔板。理想的數(shù)量嘛,取決于你所需的通量水平,以及是否有機(jī)器人的協(xié)助。completely手動(dòng)地向96孔板中添加試劑,這并非不可行,但有電動(dòng)移液器或機(jī)器人的幫助當(dāng)然更好。擴(kuò)展到384孔板,就更加需要機(jī)器人,而1536孔板更是絕對(duì)需要。當(dāng)然,高密度多孔板的挑戰(zhàn)還在于分析小型化。
3. 微孔板的顏色
多孔板的顏色也與應(yīng)用息息相關(guān)。如果用相差顯微鏡或肉眼觀察細(xì)胞,可選擇透明的多孔板。不過(guò),對(duì)于可見(jiàn)光光譜以外的應(yīng)用(如冷光或熒光),有顏色的多孔板(如白色或黑色)則是必需的。在使用從頂部讀數(shù)的儀器時(shí),底部應(yīng)該是不透明的,而使用顯微鏡或底部讀數(shù)的儀器時(shí),應(yīng)選擇底部透明的多孔板。冷光樣品通常選擇白色表面,以便最大限度提高信號(hào)的反射率,而大于300 nm的熒光應(yīng)用通常使用黑色表面,以吸收激發(fā)信號(hào)。有顏色的表面還可以防止相鄰孔之間的信號(hào)串?dāng)_。
4. 表面處理
選擇哪種細(xì)胞表面處理,這要取決于你培養(yǎng)的是懸浮細(xì)胞還是貼壁細(xì)胞。對(duì)于懸浮或球體細(xì)胞培養(yǎng),建議使用BRAND inertGrade™微孔板,它經(jīng)過(guò)patent的疏水凝膠處理,可抑制細(xì)胞或蛋白附著。對(duì)于輕松附著的貼壁細(xì)胞(如HeLa),標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)表面就足夠了。對(duì)于那些貼壁有困難的細(xì)胞(如原代細(xì)胞),或涉及到嚴(yán)格洗滌的應(yīng)用,建議使用BRAND的cellGrade™微孔板。這種unique的表面與多聚賴氨酸處理的表面相似,但它不是涂層,而是塑料性質(zhì)的物理變化,因此不需要冷藏。對(duì)于那些敏感細(xì)胞或血清量減少的細(xì)胞,建議使用cellGrade™ plus表面。
5.根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板
Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究,產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對(duì)晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。有兩種sitting 和handing drop兩種方法,兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。材料上選擇crystal class polymer ,特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu)。細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料,材料是treated sufface,便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料,同時(shí)還有l(wèi)ow binding surface。
具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/span>
平底和圓底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇
1.貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。
2.懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。
3.U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 。
4.V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。
酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),也可以用來(lái)測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,一般不用做細(xì)胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè),需要更高的要求和特定的酶標(biāo)工作液。常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,一般在2~3mm范圍,結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量。若加液量過(guò)多會(huì)影響氣體(氧氣)交換,而且在搬動(dòng)過(guò)程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握。
平底的什么類型的細(xì)胞都可用,但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少,如做克隆時(shí),就用96孔平底板。
另外﹐做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí),無(wú)論貼壁和懸浮細(xì)胞,一般均用平底板。
問(wèn)題1:培養(yǎng)板有4、6、12、24、48、96孔幾種規(guī)格 ,但不知道到底什么實(shí)驗(yàn)用哪種規(guī)格?
答:要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求,流式一般用6孔,MTT一般用96孔,細(xì)胞爬片一般用24孔等!要具體根據(jù)實(shí)驗(yàn)來(lái)定。
問(wèn)題2:請(qǐng)問(wèn)Terasaki板與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?
答:Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究,產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對(duì)晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析。
有兩種sitting 和handing drop兩種方法,兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。
材料上選擇crystal class polymer ,特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu)。
細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)與伸展。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長(zhǎng)材料,同時(shí)還有l(wèi)ow binding surface,有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對(duì)材料的選擇。
問(wèn)題3:想測(cè)吸光度用酶標(biāo)儀,用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎?請(qǐng)問(wèn)酶標(biāo)板多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別?
答:用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測(cè)吸光度肯定可以拉,我們經(jīng)常用它來(lái)做樣品的蛋白定量和MTT檢測(cè)。
區(qū)別:酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),但也可以用來(lái)測(cè)蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測(cè),它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。