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簡要描述:人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF-A)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒適用于體外定量檢測人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中天然和重組VEGF-A濃度。本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
產(chǎn)品型號:
所屬分類:Human/人檢測試劑盒
更新時間:2015-11-03
人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF-A)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人VEGF-A抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品
中的人VEGF-A會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人VEGF-A抗體
和辣根過氧化物酶標記的親和素??谷薞EGF-A抗體與結(jié)合在包被抗體上的人VEGF-A結(jié)合、生
物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB
在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,
VEGF-A濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中VEGF-A的濃度。
人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF-A)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測前準備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超
過50℃,使用時洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,
靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為2000pg/mL)。
然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃
度:2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL,標準品&樣品稀釋液直接作為空
白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL標準品:取0.5mL2000pg/mL的上述標準品加入含有0.5mL標
準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. *化抗體工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配
制100-200μL。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當(dāng)日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應(yīng)多配制
100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當(dāng)日使用。
標準品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據(jù)實際用量來稀釋,如200μL/管)
人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF-A)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作概要
1. 在各孔中加入標準品或樣品各 100μL, 37℃孵育 90 分鐘
2. 倒去孔內(nèi)液體,加入 100μL *化抗體工作液,37℃孵育 60 分鐘
3. 洗滌 3 次
4. 加入 100μL 酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育 30 分鐘
5. 洗滌 5 次
6. 加入 90μL 底物溶液, 37℃孵育 15 分鐘左右
7. 加入 50μL 終止液,立即在 450nm 波長處測量 OD 值
8. 結(jié)果計算
人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF-A)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒特別說明:
*: [96T/48T](打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整)
#: 一周內(nèi)使用可存于4℃,需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.
相關(guān)試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些,請在使用時量取而非直接倒出!
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