染料法熒光定量PCR試劑盒中聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是體外酶促合成特異DNA片段的一種經(jīng)典方法，由變性、退火及適溫延伸組成，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)，是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種：探針?lè)晒舛縋CR試劑盒和染料法熒光定量PCR試劑盒。而熒光定量PCR的方法相應(yīng)的可分為特異類(lèi)和非特異類(lèi)兩類(lèi)，特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物；而非特異性檢測(cè)方法是在在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量熒光染料，熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射出熒光信號(hào)。前者由于增加了探針的識(shí)別步驟，特異性更高，但后者則簡(jiǎn)便易行。
染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項(xiàng)：
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。
2. 試劑若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在溫水水浴中預(yù)熱十分鐘，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1kb以?xún)?nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
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