重組柔嫩艾美耳球蟲SO7 蛋白的的原核表達(dá)及其對同源性感染的免疫保護(hù)性研究

實驗原理

通過原核表達(dá)系統(tǒng)大腸桿菌來表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲的一個抗原基因SO7，把純化出來的蛋白進(jìn)行免疫，首免和二免后感染，觀察免疫效果。

實驗試劑

T4DNA連接酶；限制性內(nèi)切酶；質(zhì)粒小提試劑盒；DNA膠回收試劑盒

實驗設(shè)備

PCR儀；伯樂電泳儀；臺式高速冷凍離心機(jī)

實驗材料

雞：一日齡的SPF 雞。

球蟲：北京艾美耳球蟲強(qiáng)毒株。

細(xì)菌：胸苷酸酶基因突變以后形成的χ13型的大腸桿菌。

質(zhì)粒：pMG36e重組質(zhì)粒是由中國科學(xué)院微生物研究所提供的。

實驗步驟

1. 構(gòu)建沒有抗藥基因的重組表達(dá)載體：pMG36t-SO7；
2. 陽性重組大腸桿菌的鑒定和構(gòu)建的pMG36t-SO7的穩(wěn)定性鑒定；
3. 用氯化鈣處理E. coli χ13 使pMG36t-SO7進(jìn)入到E. coli χ13體內(nèi)thyA突變位置處；

4. 用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)E. coli χ13，篩選陽性的E. coli χ13，即：E. coli χ2；

5. SO7 蛋白在E.coli χ2里表達(dá)的鑒定：用SDS-PAGE和蛋白質(zhì)印跡法來進(jìn)行；
6. 用艾美爾球蟲卵囊對雞進(jìn)行免疫和攻毒。免疫和感染程序見下圖：

                     

7. 用E.coli χ2介導(dǎo)的免疫反應(yīng)；

8. E.coli χ2對同源感染的免疫效果的評估；
9. 數(shù)據(jù)分析。

注意事項

近年來活的弱毒苗已經(jīng)開始使用了。然而，在使用這種疫苗時安全問題不容忽視，另外，大規(guī)模生產(chǎn)活的弱毒苗價格很昂貴，新一代的疫苗，像使用基因重組技術(shù)來表達(dá)寄生蟲抗原，將會產(chǎn)生更好的預(yù)防效果。

對于一個成功的重組疫苗來說，一種有效的抗原呈遞系統(tǒng)是至關(guān)重要的，抗原的入侵途徑和抗原的選擇也是影響成功的決定性因素。

在感染過程中，針對球蟲會產(chǎn)生特異性的抗體，而且這些抗體對處在細(xì)胞外階段的球蟲也能發(fā)生中和反應(yīng)。