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抗體課堂:正確選擇同型對(duì)照,陽(yáng)性對(duì)照
同型對(duì)照的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的,而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。同型對(duì)照要與一抗的來(lái)源、Ig分型和標(biāo)記*一致。例如:一抗是FITC標(biāo)記,其抗體分型是小鼠的IgG1,則同型對(duì)照要選擇是FITC標(biāo)記的小鼠的IgG1。這里如同使用流式抗體一樣,同樣的不可離開(kāi)說(shuō)明書(shū)!
多抗的同型對(duì)照:
絕大部分的同型對(duì)照產(chǎn)品都是單克隆抗體,因此不適用于作為多克隆抗體的對(duì)照(因?yàn)槎嗫购卸喾NIgG的亞型)。
陽(yáng)性對(duì)照的使用是一個(gè)實(shí)驗(yàn)中確定抗體及檢測(cè)系統(tǒng)是否正常工作的依據(jù),也是確定待測(cè)標(biāo)本中是否存在待測(cè)蛋白的一個(gè)依據(jù)!尤其是檢測(cè)的標(biāo)本是不確定是否有待測(cè)蛋白表達(dá)時(shí)。因此當(dāng)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)時(shí),的選擇是實(shí)驗(yàn)合適的陽(yáng)性對(duì)照。
說(shuō)明書(shū)上都有推薦的陽(yáng)性對(duì)照。但是如果說(shuō)明書(shū)上沒(méi)有推薦時(shí),請(qǐng)參考以下條款:
看看說(shuō)明書(shū)中是否有Abreviews。任何被其他客戶成功檢測(cè)的組織、細(xì)胞或者裂解物均可以作為合適的陽(yáng)性對(duì)照!
根據(jù)說(shuō)明書(shū)上的Swiss-Prot或Omnigene數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)查找。這些數(shù)據(jù)庫(kù)經(jīng)常會(huì)列出該蛋白表達(dá)的組織,這也可以作為合適的陽(yáng)性對(duì)照!
查查該蛋白的GeneCards吧,這里通常會(huì)有蛋白在不同組織的表達(dá)水平。
對(duì)于不同的問(wèn)題,不同的測(cè)試,相關(guān)性的不同的性能,拿流式抗體來(lái)說(shuō),在使用的過(guò)程中要特別謹(jǐn)說(shuō)明書(shū)使用!
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