探針法熒光定量PCR試劑盒是一種用于定量檢測(cè)特定DNA或RNA序列的熒光PCR技術(shù)。該技術(shù)結(jié)合了常規(guī)PCR技術(shù)的高靈敏度和熒光定量技術(shù)的高精度,被廣泛應(yīng)用于各種生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,如病毒檢測(cè)、基因表達(dá)分析、突變分析等。
1.引物:引物是用于指導(dǎo)PCR反應(yīng)的短DNA序列,通常由15-30個(gè)核苷酸組成。在熒光定量PCR中,通常使用兩種引物,一種用于擴(kuò)增目標(biāo)序列,另一種用于擴(kuò)增內(nèi)參序列,以便于對(duì)反應(yīng)進(jìn)行校正。
2.探針:探針是一種與目標(biāo)序列特異性結(jié)合的熒光標(biāo)記DNA序列。在熒光定量PCR中,探針通常與目標(biāo)序列互補(bǔ),并且在探針上標(biāo)記熒光基團(tuán),以便于通過熒光信號(hào)檢測(cè)目標(biāo)序列的擴(kuò)增。
3.DNA聚合酶:DNA聚合酶是用于催化DNA合成的酶。在熒光定量PCR中,通常使用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶,以便于在高溫下進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
4.熒光染料:熒光染料是一種用于標(biāo)記探針的物質(zhì),以便于通過熒光信號(hào)檢測(cè)探針與目標(biāo)序列的結(jié)合。常用的熒光染料包括熒光素、羅丹明和Cy等。
5.其他成分:試劑盒中還包含其他必要的成分,如緩沖液、鎂離子、dNTPs等,以支持PCR反應(yīng)的進(jìn)行。
探針法熒光定量PCR試劑盒具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.高特異性:由于使用了探針和引物,該技術(shù)可以高度特異性地?cái)U(kuò)增目標(biāo)序列,減少了非特異性擴(kuò)增的可能性。
2.高靈敏度:由于使用了熒光信號(hào)檢測(cè)目標(biāo)序列的擴(kuò)增,該技術(shù)具有很高的靈敏度,可以檢測(cè)低拷貝數(shù)的DNA或RNA序列。
3.實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè):在反應(yīng)過程中可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào),從而可以直接反映出目標(biāo)序列的擴(kuò)增情況。
4.高重現(xiàn)性:由于使用了相同的方法和試劑盒,實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有很高的重現(xiàn)性。